摘要：卵黃蛋白原(Vitellogenin，Vtg)被認為是一種理想的雌激素和類雌激素標志物， 通過建立一種中華鱘Acipenser sinensis血漿Vtg水平的檢測方法， 進而開發(fā)一項中華鱘性腺成熟度的診斷技術。首先通過RACEPCR方法擴增得到中華鱘vtg基因cDNA序列， 氨基酸序列分析預測其蛋白分子量大小為196 kD。構建Vtg功能區(qū)段融合原核表達載體pET32a(+)-vtg并表達純化重組蛋白， 并以重組蛋白免疫兔子獲得多克隆抗血清，Western blotting檢測顯示抗血清的特異性較好。以純化的中華鱘重組Vtg蛋白為抗原，中華鱘Vtg多克隆抗血清為抗體，建立了中華鱘血漿Vtg的間接競爭酶聯免疫檢測方法(ELISA)，標準曲線線性回歸方程為y=–0.2916x+0.6794， 相關系數R2為0.9976。該方法檢測的靈敏度為4.12 μg/mL，最低檢測限為0.3 μg/mL， 批內和批間變異系數分別為2.52%和3.42%。通過對不同發(fā)育時期雌性中華鱘血樣檢測， 表明此ELISA方法可初步用于雌性中華鱘性腺發(fā)育時期監(jiān)測。

冷小茜, 葉歡, 杜浩, 李創(chuàng)舉, 危起偉. 中華鱘Vtg間接競爭ELISA檢測方法的建立和應用. 水生生物學報, 2018, 42 (4): 779-785.